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當(dāng)前位置:首頁技術(shù)文章細(xì)胞培養(yǎng)生物反應(yīng)器放大效果不理想,可能因?yàn)槟銢]有注意到這幾點(diǎn)?

細(xì)胞培養(yǎng)生物反應(yīng)器放大效果不理想,可能因?yàn)槟銢]有注意到這幾點(diǎn)?

更新時(shí)間:2022-09-22點(diǎn)擊次數(shù):2261

隨著轉(zhuǎn)基因制藥技術(shù)的不斷發(fā)展,細(xì)胞培養(yǎng)放大的規(guī)模化需求也在逐漸增大,通常在實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行的小批量細(xì)胞傳代實(shí)驗(yàn)由于投入成本小,操作過程熟練,基本不會(huì)存在太大問題,當(dāng)進(jìn)入生物反應(yīng)器規(guī)模化培養(yǎng)階段時(shí),投入的成本往往較大,需要考慮的因素也變多,稍不注意就會(huì)影響到細(xì)胞的產(chǎn)量或質(zhì)量。

其實(shí)細(xì)胞的培養(yǎng)放大不論是處在哪個(gè)階段的放大都需要保持在同一恒定的環(huán)境下進(jìn)行,這樣才能培養(yǎng)出生長密度、細(xì)胞存活率、以及培養(yǎng)產(chǎn)物等維持相對(duì)穩(wěn)定的狀態(tài)。所以在進(jìn)入生物反應(yīng)器擴(kuò)培階段時(shí),需要注意到以下幾點(diǎn):

一、攪拌槳類型、攪拌轉(zhuǎn)速及剪切力

通常使用的攪拌式生物反應(yīng)器,可以使細(xì)胞與營養(yǎng)物質(zhì)充分混合、懸浮具有較高的通氣溶氧環(huán)境,但是攪拌槳類型以及過快的攪拌轉(zhuǎn)速帶來了較高的剪切力,由于細(xì)胞不同于微生物,構(gòu)成細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)較為脆弱,對(duì)剪切力比較敏感,通常情況下,細(xì)胞培養(yǎng)適宜的葉端速為 1-2m/s。所以選擇合適的攪拌槳類型及合適的轉(zhuǎn)速控制也是很有必要的。搏旅的Bio PRO系列微載體培養(yǎng)生物反應(yīng)器在設(shè)計(jì)時(shí)采用提升式攪拌槳在保證混合效果的同時(shí)也有效降低了細(xì)胞剪切力,對(duì)于DISKS載體來說,這種攪拌槳的設(shè)計(jì)幾乎不會(huì)因剪切力和通氣氣泡對(duì)細(xì)胞造成任何不良影響。

攪拌速率計(jì)算公式如下:

 

 

 

葉端速計(jì)算公式如下

 

 

二、通氣量、溶氧度、PH/DO氧傳遞速率參數(shù)控制 

細(xì)胞放大培養(yǎng)過程中,溶氧度參數(shù)、CO2濃度、以及通氣量的大小等重要參數(shù)都會(huì)直接影響到細(xì)胞的生長狀態(tài),比如隨著CO2濃度的增加,PH值也會(huì)相應(yīng)增大從而影響到培養(yǎng)環(huán)境的改變不利于細(xì)胞生長;所以溶氧度及二氧化碳濃度的控制需要及時(shí)準(zhǔn)確。搏旅生產(chǎn)的Bio PRO系列微載體培養(yǎng)生物反應(yīng)器系列采用了熱質(zhì)流控制儀全面實(shí)現(xiàn)了氣體流量的全自動(dòng)控制;并且采用PID控制系統(tǒng)準(zhǔn)確控制溶氧度、CO2濃度等,從而及時(shí)平衡PH參數(shù),在通氣設(shè)計(jì)上深層通氣采用軟、硬件相結(jié)合的控制方式有效消除了培養(yǎng)基的逆流,并采用了獨(dú)立的滅菌系統(tǒng),保證滅菌的*性。

三、滅菌操作的*性

我們知道在細(xì)胞生長過程中,微生物的危害是致命性的,滅菌的*性也成為影響細(xì)胞存活率的重要因素之一。在進(jìn)行取樣檢驗(yàn),補(bǔ)充培養(yǎng)基等操作過程中很容易造成細(xì)菌污染。楚怡生物反應(yīng)器設(shè)計(jì)了在位滅菌加樣/取樣閥組,有效避免了操作污染,在進(jìn)氣與尾氣過濾器、物料進(jìn)口、管底閥、管道等部件也都采用了獨(dú)立控制的滅菌系統(tǒng),以達(dá)到整罐滅菌,360°滅菌的效果,保證了滅菌的*性。 

除了以上幾個(gè)方面,培養(yǎng)基的選擇、培養(yǎng)方式的選擇攪拌槳類型、電極、溫度、混合時(shí)間、細(xì)胞密度、操作方便性、生物反應(yīng)器材質(zhì)、氣體壓力調(diào)節(jié)等相關(guān)參數(shù)。由此可見,熟練掌握細(xì)胞生產(chǎn)擴(kuò)培過程中的各項(xiàng)參數(shù)并做好記錄及數(shù)據(jù)分析是細(xì)胞規(guī)模擴(kuò)培工藝的核心也是細(xì)胞的放大培養(yǎng)成功的關(guān)鍵步驟。

 

      蘇州阿爾法生物所提供的楚怡生物反應(yīng)器常用于MDCK細(xì)胞、HEK293細(xì)胞培養(yǎng),懸浮細(xì)胞培養(yǎng)、貼壁細(xì)胞培養(yǎng)、微載體培養(yǎng)、微生物培養(yǎng)、生物制藥等領(lǐng)域,不僅有適合實(shí)驗(yàn)使用的中小型生物反應(yīng)器,還可以根據(jù)不同用戶需求定制大型尺寸的生產(chǎn)型發(fā)酵罐、生物反應(yīng)器。實(shí)現(xiàn)了廠商直供,一罐多用,同時(shí)我們還提供免費(fèi)的安裝服務(wù)、免費(fèi)技術(shù)支持、免費(fèi)操作指導(dǎo)等服務(wù)。


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